環狀 RNA 在體內合成的方式主要是依賴Alu 反向互補序列和 RNA 結合蛋白的反向剪接作用。環狀 RNA 的體外合成是通過體外轉錄獲得線性 RNA 前體，隨后通過多種方法使得RNA 環化。

基于Ⅱ類內含子的 PIE 策略中經過篩選優化后的Ⅱ類內含子可以使 RNA 高效自剪接成環且無外顯子序列殘留，而且該反應無需額外提供鳥苷酸和高溫亦可進行，這種方案簡化了環狀 RNA的成環反應過程以及原料使用，降低了工業成本，是理想的工程級別的環狀 RNA體外合成方案。

在真核生物中，mRNA5′端甲基化的帽子結構被認為是翻譯起始必要的元件，環狀RNA與mRNA 相比，雖然缺少翻譯所需要的帽子結構，但在 1995 年有學者發現通過添加某些病毒的IRES 序列可以介導環狀 RNA 翻譯蛋白。

遞送系統是保證核酸藥物有效性和安全性的關鍵，其在保護 RNA 結構、增強靶向能力、熱穩定性和減少不良反應等方面起到重要作用。2023 年東南大學姚紅紅教授團隊發現從外泌體中分離得到的 EV-circSCMH1能夠有效促進缺血性腦卒中模型小鼠與恒河獼猴腦血管修復。